產(chǎn)品訂購(gòu)：

品名	規(guī)格	包裝	單價(jià)	貨期
RNA病毒基因組提取試劑盒		50T	1155元	現(xiàn)貨
RNA病毒基因組提取試劑盒		100T	1687.4元	現(xiàn)貨

性狀：
試劑盒組成 50 100
蛋白酶K 1ml 2ml
洗柱液 50ml 50ml×2
結(jié)合液 25ml 50ml
漂洗液 15ml 30ml
RNase free ddH2O 15ml 15ml×2
RNase free吸附柱 50個(gè) 100個(gè)
RNase free收集管(2ml) 50個(gè) 100個(gè)

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因組，不適合于細(xì)胞等組織內(nèi)RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組RNA可用于RT-PCR實(shí)驗(yàn)。

 

操作步驟：

使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入一瓶新開(kāi)啟的無(wú)水乙醇，加入到離瓶口約0.5-1cm距離，蓋好搖勻。所有離心步驟均在2-8℃條件下進(jìn)行。

1、  取病毒上清液0.5ml，12000rpm離心5min，盡量吸盡上清使用，棄去沉淀（如無(wú)沉淀可省去此步）。

2、  向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混勻，65℃消化10min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

3、  吸附柱前處理：從包裝中取出吸附柱，放入收集管中，加入700ul 洗柱液，室溫放置2分鐘，2-8℃ 12000 rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中待用。

4、  向病毒上清中加入500ul結(jié)合液，充分混勻。再向管中加入400ul無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響RNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，靜置2min。（吸附柱的最大容積為750ul，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。）

5、  12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

6、  向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7、  向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8、  12000rpm離心2min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。

10、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的RNase free ddH2O，室溫放置5min，12000rpm離心2min。即可得到高質(zhì)量的病毒基因組RNA。

注意事項(xiàng)：

1、經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase污染。使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。

2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的RNA提取量也下降。

3、若結(jié)合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。

4、如果樣品消化不徹底，后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。

5、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率。

6、RNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-70℃，以防RNA降解。

7、RNA檢測(cè)：得到的基因組RNA片段的大小與病毒的保存條件和種類(lèi)等因素有關(guān)。由于病毒不含有核糖體RNA，所以常規(guī)電泳無(wú)法檢測(cè)，只有后期實(shí)驗(yàn)才可檢測(cè)到。D260值為1相當(dāng)于大約40 μg/ml單鏈RNA。

貯存：
室溫（15℃-25℃）干燥條件下可保存12個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2℃-8℃。