品名 | 規(guī)格 | 包裝 | 單價(jià) | 貨期 |
RNA病毒基因組提取試劑盒 | 50T | 1155元 | 現(xiàn)貨 | |
RNA病毒基因組提取試劑盒 | 100T | 1687.4元 | 現(xiàn)貨 |
本試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因組,不適合于細(xì)胞等組織內(nèi)RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組RNA可用于RT-PCR實(shí)驗(yàn)。
操作步驟:
使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入一瓶新開(kāi)啟的無(wú)水乙醇,加入到離瓶口約0.5-1cm距離,蓋好搖勻。所有離心步驟均在2-8℃條件下進(jìn)行。
1、 取病毒上清液0.5ml,12000rpm離心5min,盡量吸盡上清使用,棄去沉淀(如無(wú)沉淀可省去此步)。
2、 向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混勻,65℃消化10min,期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。
3、 吸附柱前處理:從包裝中取出吸附柱,放入收集管中,加入700ul 洗柱液,室溫放置2分鐘,2-8℃ 12000 rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中待用。
4、 向病毒上清中加入500ul結(jié)合液,充分混勻。再向管中加入400ul無(wú)水乙醇,充分混勻,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響RNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,靜置2min。(吸附柱的最大容積為750ul,可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。)
5、 12000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
6、 向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
7、 向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8、 12000rpm離心2min,將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。
10、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的RNase free ddH2O,室溫放置5min,12000rpm離心2min。即可得到高質(zhì)量的病毒基因組RNA。
注意事項(xiàng):
1、經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌,可能導(dǎo)致RNase污染。使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致提取的RNA提取量也下降。
3、若結(jié)合液中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解。
4、如果樣品消化不徹底,后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況,可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。
5、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul,體積過(guò)小會(huì)影響回收效率。
6、RNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-70℃,以防RNA降解。
7、RNA檢測(cè):得到的基因組RNA片段的大小與病毒的保存條件和種類(lèi)等因素有關(guān)。由于病毒不含有核糖體RNA,所以常規(guī)電泳無(wú)法檢測(cè),只有后期實(shí)驗(yàn)才可檢測(cè)到。D260值為1相當(dāng)于大約40 μg/ml單鏈RNA。
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