品名 | 規(guī)格 | 包裝 | 單價 | 貨期 |
全血基因組DNA提取試劑盒 | 50T | 660元 | 現貨 | |
全血基因組DNA提取試劑盒 | 100T | 1155元 | 現貨 |
本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng),提取全血基因組DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司特有新型材料,能夠高效、專一吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。 提取的基因組DNA片段大,純度高,質量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作,包括酶切、 PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。
操作步驟:
使用前請先在漂洗液和溶液B中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1 、樣品的處理(本產品適用于處理新鮮的或已經添加抗凝劑的0.lml-1ml 血液樣品):
a 、在血液樣品中加入2-3 倍體積的紅細胞裂解液,充分顛倒混勻,12000rpm離心1min,小心吸去上清,沉淀應為白色或淡紅色,如果裂解不徹底,可重復以上述步驟一次。向沉淀中加200ul 溶液A,振蕩至徹底混勻。
b 、 如果處理的血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的血液,其紅細胞為有核細胞,因此處理量為5-20u1 ,不需要再用紅細胞裂解液處理,直接加200ul 溶液 A,振蕩至徹底混勻。
2 、向懸浮液中加入 20ul (10mg/ml) 的RNase A,充分顛倒混勻,室溫放置10min 。
3 、加入 20ul ( 10mg /ml ) 的蛋白酶K,充分顛倒混勻,65℃水浴消化 30-60min ,消化期間可顛倒離心管混勻數次,直至樣品消化完全為止。
4 、加入 2 倍體積溶液 B(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇),充分顛倒混勻,此時可能會出現絮狀沉淀,不影響DNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,室溫放置2min。
5 、12000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
6 、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇), 12000rpm 離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
7 、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8 、12000rpm離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR 等。
9 、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm離心1min。
10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,12000rpm離心2min,即可得到高質量的基因組DNA。
注意事項:
1、本試劑盒置于室溫( 15 -25℃) 干燥條件下可保存12個月,更長時間的保存可置于2 -8℃。
2、常用的血液抗凝劑有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制備大分子量血液基因組DNA,可優(yōu)先考慮使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因為用肝素抗凝的血液提取的基因組DNA進行PCR擴增時,有PCR擴增抑制現象。
3、樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的DNA片段較小且提取量也下降。
4、如果試劑盒中的溶液出現沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響效果。
5、絕大多數哺乳動物全血中的紅細胞無核,故在提取基因組DNA時需去除不含DNA的無核紅細胞,以免影響白細胞裂解和DNA釋放。如果處理的血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的血液,其紅細胞為有核細胞,因此處理量減少為5-20ul,不需要再用紅細胞裂解液來裂解紅細胞。
6、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul,體積過小會影響回收效率:洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響;若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍),pH 值低于7.0會降低洗脫效率。
![]() |