質(zhì)量標準:產(chǎn)品簡介:本試劑盒采用酶法破碎酵母細胞壁和堿裂解法裂解酵母細胞來提取酵母質(zhì)粒DNA。所采用的酵母破壁酶能有效地破壞酵母細胞壁,提高酵母質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細胞中其他有機化合物。使用本試劑盒提取的酵母質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學實驗,包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗。本試劑盒無需使用酚、氯仿等有毒試劑,操作安全。
注意事項:
1、溶液YP1在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入),混勻,置于2-8℃保存。
2、第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標簽的說明在漂洗液中加入無水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇)。3 、使用前請先檢查溶液 YP2 和溶液YP3 是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在 37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。
4 、洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 50ul ,體積過小影響回收效率;洗脫液的 pH值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH 值在8.0 左右(可用NaOH 將水的pH 值調(diào)至此范圍),pH 值低于7.0 會降低洗脫效率;DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防 DNA降解。
5 、質(zhì)粒得率與酵母菌株、質(zhì)??截悢?shù)、培養(yǎng)條件等因素有關(guān)。通常酵母質(zhì)??截悢?shù)都很低,一般通過電泳或分光光度計法都很難檢測到,可通過PCR 或轉(zhuǎn)化大腸桿菌來檢測。
6 、DNA濃度及純度檢測:得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)?;厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰, OD260值為1 相當于大約50 μg/ml 雙鏈DNA、40 μ g/ml 單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9 ,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。