RNaseA ( 10mg/ml ) 1ml 
溶液Ⅰ 60ml
溶液Ⅱ 60ml 
溶液Ⅲ 80ml
漂洗液 2×15ml
洗脫液 30ml
吸附柱 10個
收集管(50ml) 10個
說明書 1份

       本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞，根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物，一般從50-100ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中，可快速提取200-300μg高純度高拷貝的質(zhì)粒DNA，提取率達85-90%。 使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗。

注意事項：

1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入)，混勻，置于2-8℃保存。

2、第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標簽的說明在漂洗液中加入無水乙 醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇。

3、使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn)象 可在37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。

4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子，如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機室溫下進行離心。

5、如果是提取革蘭氏陽性菌質(zhì)粒，必須在裂解細胞前破細胞壁，方法如下：收集適量菌體，加入5ml溶液Ⅰ，充分懸浮菌體，加入溶菌酶至終濃度為10-20mg/ml，37℃處理30min左右。加入溶菌酶的濃度和處理時間可根據(jù)不同的菌株和具體試驗條件進行調(diào)整。還可以選擇D1120、D1130革蘭氏陽性菌質(zhì)粒提取試劑盒。

6. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于500ul，體積過小影響回收效率；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)， pH值低于7. 0會降低洗脫效率。 DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。

7. 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于10kb的大質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，使用400-800ml過夜培養(yǎng)物，同時按照比例增加溶液Ⅰ 、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時可以適當(dāng)?shù)难娱L時間，以增加提取效率。

8. DNA濃度及純度檢測：得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml雙鏈DNA、 40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響吸光值，但并不表示純度低。