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真菌基因組DNA提取試劑盒

英文名稱:
分子式:
分子量:
別名:
產(chǎn)品訂購:
品名 規(guī)格 包裝 單價 貨期
真菌基因組DNA提取試劑盒 50T 詢價 現(xiàn)貨
真菌基因組DNA提取試劑盒 100T 詢價 現(xiàn)貨
性狀:
試劑盒內(nèi)容:50T 100T
RNase A 1ml 1ml×2
蛋白酶K 1ml 1ml×2
玻璃珠 6g 11g
溶液A 10ml 20ml
溶液B 10ml 20ml
漂洗液 15ml 15ml×2
洗脫液 10ml 20ml
吸附柱 50個 100個
收集管 50個 100個
說明書 1份 1份

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):
產(chǎn)品簡介:

    真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物,種屬很多,已報(bào)道的屬達(dá)1萬以上,種超過10萬個。真菌通常又分為三類,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。對于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠處理,而對于大型真菌,可直接用液氮研磨。經(jīng)過前期處理的菌液,用硅質(zhì)膜吸附,即可得到高純度的基因組。提取純化后的DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。

操作步驟:

    使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。

1、樣品的處理:

       1)對于酵母菌,取1-2ml培養(yǎng)好的菌液,離心收集,棄上清。加入200ul 溶液A,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約5-10min。

       2)霉菌(孢子也可相同處理):取50-100mg菌絲,加200ul溶液A,用玻璃研磨器適當(dāng)研磨分散菌絲,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約30min。

       3)大型真菌(如蘑菇等):稱取50-100mg樣品,倒入適量的液氮,立即研磨重復(fù)3 次,使樣品研成粉末(如無液氮,可加200ul溶液A后用玻璃研磨器適當(dāng)研磨),加200ul溶液A,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約5min。

2、 加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分混勻,55℃水浴消化30min,消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。 12000rpm離心2min。將上清轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中。如有沉淀,可再次離心。

3、在上清中加入200ul溶液B,充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀,可放55℃水浴5min,沉淀即會消失,不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,說明樣品消化不徹底,可能導(dǎo)致提取的DNA量少及不純,還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子,請?jiān)黾酉瘯r間。

4、再加入200ul無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,不影響DNA的提取,將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,放置2分鐘。

5、12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

6、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm離心2min,將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。

9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm離心1min。

10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心2min,即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。

注意事項(xiàng):

1. 由于真菌種類萬千,對于一些特別難處理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振蕩,蛋白酶K處理,一般都可以得到一定量的基因組DNA,如電泳檢測很弱,一般PCR都會有較好結(jié)果。

2. 若溶液A或溶液B中有沉淀,可在55℃水浴中重新溶解。

3. 如果DNA提取量很少,可加長玻璃珠處理時間,如果提取DNA成彌散短條帶,可減少玻璃珠處理時間。

4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul,體積過小會影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍),pH值低于7.0會降低洗脫效率;DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。

5. DNA濃度及純度檢測:得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因?yàn)閜H值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。

6. 在確保樣品無誤的情況下,如經(jīng)過多次試驗(yàn),都無法提出DNA,請將部分樣品寄至我公司,我們代為摸索優(yōu)化條件,以使您的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛘_M(jìn)行下去。

貯存:
室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復(fù)檢期12個月,2℃-8℃保存時間更長。
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