品名 | 規(guī)格 | 包裝 | 單價 | 貨期 |
BCA蛋白濃度測定試劑盒 | 500微孔(50T) | 445.5元 | 現(xiàn)貨 |
堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+, Cu+與BCA試劑形成紫藍(lán)色的絡(luò)合物,測定其在562nm處的吸收值,并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS,Triton X-100,Tween不影響檢測結(jié)果,但受螯合劑(EDTA,EGTA)、還原劑(DTT,巰基乙醇)和脂類的影響。實(shí)驗(yàn)中,若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
操作說明:
一 . 微孔酶標(biāo)儀法
1. 配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻(混合時可能會有渾濁,但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品:取10微升BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至100微升(樣品一般可用PBS稀釋),使終濃度為0.5mg/ml。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2, 4,6,8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中,加PBS補(bǔ)足到20微升。
3. 將樣品作適當(dāng)稀釋(最好多做幾個梯度,如作2倍、4倍、8倍稀釋),加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差,標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確,所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。
4. 各孔加入200微升BCA工作液,37℃放置15-30分鐘。用酶標(biāo)儀測定A562nm,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時,應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測結(jié)果。
二 . 分光光度計法
如沒有酶標(biāo)儀,可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。
注意事項:
1. 長期不用時,Cu試劑與PBS稀釋液可置于2-8℃保存,如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染則應(yīng)丟棄。BCA試劑在低溫條件下出現(xiàn)結(jié)晶沉淀時,可37℃溫育使其完全溶解, 不影響使用。
2. 樣品中若含有較多干擾物質(zhì)時,請采用Bradford蛋白濃度測定試劑盒
3. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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