NBT即氯化硝基四氮唑蘭 (Nitroblue tetrazolium chloride)，為深藍(lán)色無定形微溶物質(zhì)。BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate), 在堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase,AP）的催化作用下，BCIP會被水解產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物會和NBT發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的沉淀。

使用說明：

1. 取40ul 25×NBT 加入到1ml 1×AP反應(yīng)緩沖液中，混勻后，再加入40ul 25×BCIP混勻，即配成反應(yīng)工作液，此反應(yīng)液最好現(xiàn)配現(xiàn)用。

       注意：根據(jù)膜的大小，1×AP反應(yīng)緩沖液、25×BCIP、25×NBT的量可以等比例擴(kuò)大。

2. 把經(jīng)洗滌的PVDF/NC膜浸入反應(yīng)工作液中，于室溫平緩搖動(dòng)進(jìn)行溫育。

3. 當(dāng)?shù)鞍讕У念伾疃冗_(dá)到要求（一般約20-30分鐘）時(shí)，把膜浸入去離子水中停止反應(yīng)。

注意事項(xiàng)：

?   BCIP、NBT為可疑致癌物，請采取必要的防范措施。操作時(shí)應(yīng)戴手套，盡量避免與皮膚接觸，用后及時(shí)徹底沖洗。