品名 | 規(guī)格 | 包裝 | 單價(jià) | 貨期 |
Pfu DNA Polymerase | 10kU | 2640元 | 現(xiàn)貨 | |
Pfu DNA Polymerase | 1000U | 528元 | 現(xiàn)貨 | |
Pfu DNA Polymerase | 500U | 297元 | 現(xiàn)貨 |
Pfu DNA Ploymerase是從克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase基因的大腸桿菌中表達(dá)并經(jīng)過柱純化分離出來的重組蛋白,其分子量為90kD。由于Pfu酶具有3’→5’核酸外切酶活性,它能糾正DNA擴(kuò)增過程中產(chǎn)生的錯(cuò)配,而傳統(tǒng)的Taq酶卻不能,其它耐熱DNA Polymerase如Vent、Deep Vent、Tli、UITma等雖具有校正功能,但Pfu酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐熱DNA Polymerase中出錯(cuò)率最低的。Pfu酶無5’→3’核酸外切酶活性,PCR反應(yīng)中的延伸速度一般為0.5-1kb/min,比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶熱穩(wěn)定性更好,95℃ 1小時(shí)仍保持90%以上的活性,對于GC含量很高的模板,變性溫度可以提高到98℃而不影響其活性。Pfu酶的PCR產(chǎn)物為平末端,可加A處理再與T-載體連接或使用平末端克隆載體。
活性定義:
1單位(U) Pfu DNA Polymerase活力定義為在74℃,30分鐘內(nèi),以活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。
質(zhì)量控制:
SDS-PAGE檢測Pfu DNA Polymerase純度大于99%;經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;PCR方法檢測無宿主殘余DNA;能有效地?cái)U(kuò)增人類基因組中的單拷貝基因;室溫存放一周,無明顯活性改變。
酶貯存緩沖液:
50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol;其他成份。
適用范圍:
用于DNA的高保真擴(kuò)增,如基因表達(dá)克隆、基因定點(diǎn)突變、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變的分析(SNP)和末端補(bǔ)平等。
注意事項(xiàng):
1、PCR反應(yīng)體系加樣時(shí),最后一步加入Pfu DNA Ploymerase,整個(gè)過程宜在冰上操作。
2、取Pfu DNA Ploymerase做PCR反應(yīng)時(shí),請用高壓滅菌處理過的吸頭。
3、10×Pfu Buffer中含20 mM Mg2+,如PCR反應(yīng)需要較高M(jìn)g2+濃度,請另行加入。
4、 用Pfu酶擴(kuò)增時(shí),引物的純度要求較高,引物長度大于18個(gè)堿基,Tm值在55-80℃之間,引物濃度在0.1-0.5uM之間,比Taq酶略高。
![]() |