A B雙液 TMB顯色液
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3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine (TMB) Liquid Substrate System
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性狀:
3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine (TMB)是一種過(guò)氧化物酶底物,用于ELISA 反應(yīng)。底物產(chǎn)生一種可溶性淡藍(lán)色的末端產(chǎn)物,可在370 或 655 nm在分光光度計(jì)上讀取。TMB反應(yīng)可以用2 M H2SO4 (產(chǎn)生黃色)終止,450 nm讀取。
TMB又分可溶型和沉淀型。 可溶型:與HRP反應(yīng)形成可溶性藍(lán)褐色產(chǎn)物,適用于ELISA及其他通過(guò)液體反應(yīng)檢測(cè)HRP的應(yīng)用,與HRP反應(yīng)形成沉淀性藍(lán)褐色產(chǎn)物,一步即用型溶液,無(wú)需混合,方便快捷 。 沉淀型:適用于Western Blot及其免疫沉淀化學(xué)等,一步即用型溶液,無(wú)需混合,方便快捷 單組分TMB過(guò)氧化物酶底物正常情況下淡黃色、淡藍(lán)色或者是淡綠色。底物溶液在650nm時(shí)檢測(cè)OD值小于0.04
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn): 組成:TMB、H2O2、穩(wěn)定劑。
貯存:密閉、避光、室溫或低于室溫保存。
穩(wěn)定性:室溫或低于室溫保存,有效期大于3年。
使用方法:
根據(jù)需要等量混合,每孔100ul。注意混合馬上使用,不要超過(guò)1小時(shí),否則,敏感性降低。
溫育:上述加液后,根據(jù)個(gè)人試驗(yàn)需要,可溫育15-30分鐘。
終止:加等體積的1N的HCl或者2N的H2SO4來(lái)終止反應(yīng)。酶標(biāo)孔中反應(yīng)液從藍(lán)色變?yōu)樯?BR>讀數(shù):終止反應(yīng)后,30分鐘內(nèi)在450nm處讀數(shù)
注意:
降低底物強(qiáng)度:如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景和/或沉淀, 表明TMB底物反應(yīng)過(guò)于強(qiáng)烈。為了避免產(chǎn)生沉淀,可以在加入終止液后馬上讀數(shù);另外,可以進(jìn)一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物。為了降低非特異性背景顏色,推薦進(jìn)一步降低一抗和/或HRP結(jié)合物的濃度,盡量避免降低底物濃度。
動(dòng)力學(xué)檢測(cè):TMB單組分底物在與過(guò)氧化物酶反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生一種藍(lán)色,可以在加底物后620-650nm處讀數(shù),不需終止反應(yīng)。
貯存:
儲(chǔ)存溫度2-8°C
用途 在辣根過(guò)氧化酶HRP的數(shù)種顏色反應(yīng)底物中,TMB因其靈敏度較高及無(wú)致癌性而得到廣泛應(yīng)用。本產(chǎn)品采用穩(wěn)定敏感的配方,辣根過(guò)氧化物酶接物反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生一種深藍(lán)色的產(chǎn)物,適用于定量以及定性分析的酶聯(lián)免疫分析當(dāng)中,但不適用于膜染色或者是免疫組織化學(xué)染色。
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