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膜再生液可以對(duì)同一張膜進(jìn)行多次Western Blot檢測(cè)。在室溫條件下,將用過(guò)的膜浸泡在膜再生液10-60分鐘,可在不影響抗原蛋白的情況下清除膜上結(jié)合的抗體。隨后,可以使用不同的抗體進(jìn)行下一輪Western Blot實(shí)驗(yàn),因而可利用同一張膜進(jìn)行多次蛋白檢測(cè)。適宜從少量樣品多次檢測(cè)不同蛋白質(zhì)。即使樣品量并不匱乏,采用這一策略多次檢測(cè)同一張膜上的蛋白,能省去給藥處理、蛋白電泳和膜轉(zhuǎn)移等耗費(fèi)性步驟。而且可以消除重新上樣而帶來(lái)的誤差,使可比性更強(qiáng)。

Western Blot膜再生液特點(diǎn)是:無(wú)毒無(wú)味無(wú)害,室溫下使用,室溫下保存;可對(duì)同一張膜進(jìn)行5次以上的Western Blot檢測(cè)。

適用:清除硝酸纖維素膜或PVDF膜上結(jié)合的抗體,不影響抗原蛋白。


使用方法:

1,  將膜充分浸泡于適當(dāng)體積的再生液中,室溫洗脫10-20分鐘,時(shí)間長(zhǎng)短應(yīng)該參考后面的說(shuō)明進(jìn)行優(yōu)化,洗脫某些抗體需較長(zhǎng)時(shí)間,更有60分鐘之久。

2,  取出膜,用洗滌液(如TBST等)漂洗兩次。

3,  此時(shí)膜上抗體已除去,可再加入另一種抗體。

說(shuō)明:

1,  膜再生液實(shí)質(zhì)是在不影響膜上結(jié)合的抗原的條件下將抗體洗脫下來(lái),實(shí)際操作中,膜類型、抗體類型、濃度及抗原特性都影響洗脫難易度,因而按下面說(shuō)明優(yōu)化至關(guān)重要。

2,  用ECL顯色后,再生液洗脫幾分鐘后,可再次加入ECL顯色液顯影,如膠片上顯示條帶,表明抗體未除凈,須進(jìn)一步在再生液中浸泡,至膠片上無(wú)顯色。

3,  由于至今尚清楚的原因,使用脫脂奶粉封閉的膜要比使用BSA封閉的膜更容易再生,所以盡可能的用脫脂奶粉封閉。

4,  盡量避免讓膜干燥。

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