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Name Specifications Packing Price Delivery
50 50ml(處理血量) RMB 660 現(xiàn)貨
200 200ml(處理血量) RMB 1584 現(xiàn)貨
Quality Standard:
         50     200
10×紅細(xì)胞裂解液30ml 120ml
白細(xì)胞裂解液 30ml 120ml
蛋白沉淀液 30ml 120ml
DNA溶解液 15ml 60ml

產(chǎn)品說明:

       產(chǎn)品適用于處理新鮮的或已經(jīng)添加抗凝劑的血液樣品,采用異丙醇沉淀方法,操作簡便,尤其適合大量提取血液基因組DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常規(guī)分子生物學(xué)實驗。少量樣本也可選購我公司吸附柱型試劑盒(D1800 全血基因組DNA提取試劑盒)。

       本產(chǎn)品使用前請根據(jù)使用量將10×紅細(xì)胞裂解液用水稀釋成1×的即用型紅細(xì)胞裂解液。

處理血液量 1ml 5ml 10ml
紅細(xì)胞裂解液(1×) 5ml 25ml 50ml
白細(xì)胞裂解液 0.5ml 2.5ml  5ml
蛋白沉淀液 1ml 2.5ml 5ml
異丙醇 1ml 5ml 10ml
75%乙醇 1ml 5ml 10ml
DNA溶解液 100ul 0.5ml 1ml

操作步驟:

     以1ml全血為例

1、樣品的處理:在血液中加入3倍體積的1×紅細(xì)胞裂解液(請確認(rèn)已經(jīng)稀釋過),充分顛倒混勻,12000rpm離心1min(如為大量提取并且為大離心機(jī),可11000轉(zhuǎn)離心5min),小心吸去上清,再加入2倍體積的1×紅細(xì)胞裂解液,用移液器輕輕吹打沉淀,充分混勻,離心,棄上清,沉淀為白細(xì)胞。

2、向沉淀中加500ul白細(xì)胞裂解液,振蕩或者用移液器吹打至徹底混勻。65℃水浴10-20min,期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,直至溶液較為清澈看不見明顯細(xì)胞為止。

3、加入500ul蛋白沉淀液,充分顛倒混勻,此時會出現(xiàn)白色沉淀,65℃水浴5min,12000rpm離心5min,小心吸取上清(不要吸到下層沉淀或漂浮不溶物),轉(zhuǎn)移到干凈離心管中,如還有沉淀物,可再次離心。

4、在上清中加入1ml異丙醇,混勻。12000rpm離心5min,可看到管底有少量白色DNA沉淀,棄掉上清。

5、向離心管中加入1ml 75%乙醇,12000rpm離心5min,棄去上清液??稍俅味虝弘x心用移液器去除殘余上清。

6、將離心管敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,否則乙醇可能影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。

7、向離心管中加入100-300ul DNA溶解液,室溫放置讓DNA自然溶解。如果DNA難于溶解,可室溫放置過夜或?qū)㈦x心管置于50-60℃水浴中水浴加熱5min。

注意事項:

1、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

2、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。

3、DNA濃度及純度檢測:得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰, OD260值為1相當(dāng)于大約 50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。

Storage:
室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復(fù)檢期12個月,2℃-8℃保存時間更長。
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