Molecular Formula:
Molecular Weight:
Alias:
Product order:
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Specifications |
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現(xiàn)貨 |
Character:試劑盒內(nèi)容: 50T 100T
溶液A 25ml 50ml
溶液B 3ml 6ml
溶液C 5ml 10ml
溶液D 10ml 20ml
漂洗液 15ml 15ml×2
洗脫液 10ml 20ml
吸附柱 50個 100個
收集管 50個 100個
PCR增強劑 500ul 1ml
說明書 1份 1份
注:試劑盒開封后溶液A、B 、C 、D 需在2-8℃保存。PCR 增強劑-20 ℃保存。
Quality Standard:
產(chǎn)品簡介:
本試劑盒適合于從褐土、淤泥、火山灰等各種極端土壤環(huán)境中提取微生物 DNA。對土壤中各種細菌、真菌
有很好裂解效果,最大限度的保留了微生物DNA的多態(tài)性。
本試劑盒采用我公司特有的腐殖質(zhì)吸附材料,可高效專一的去除各種腐殖質(zhì)成分而絲毫不會影響DNA的
產(chǎn)率,純度較酚、氯仿抽提法提高數(shù)倍。
使用本試劑盒提取的DNA產(chǎn)量大、完整性好,可直接用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR 、文庫構(gòu)建、
Southern 雜交等實驗。
操作步驟:
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機
在室溫下離心。
1、稱取土壤樣本 0.1-0.5g,在液氮中充分研磨成細粉末,加入 450ul 溶液A 震蕩混勻。
* 也可直接稱取樣本 0.1-0.5g 于離心管( 建議使用 2ml 圓底管) ,加入 450ul 溶液 A 劇烈震蕩混勻
1-2min 至沒有固體塊。 使用液氮研磨效果最佳。
2 、加入50ul 溶液B 充分顛倒混勻( 不要劇烈震蕩),65℃水浴 6min,每2min充分顛倒混勻一次。
3 、加入100ul 溶液C 充分顛倒混勻( 不要劇烈震蕩),12000rpm離心10min 。
4 、將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管,12000rpm離心2min 。
5 、在吸附柱中加入 200ul 溶液D ,將離心后的上清加入到帶有溶液 D 的吸附柱中,用移液器吹吸幾次混
勻,12000rpm離心1min。
6 、將收集管中的濾出液混勻后重新吸入吸附柱( 必須),12000rpm離心1min。
7 、倒掉收集管中的廢液,在吸附柱中加入漂洗液 500ul,12000rpm離心1min。
8 、倒掉收集管中的廢液,重復(fù)步驟 7 兩次(共漂洗三次)。
9 、倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管,12000rpm離心2min 。
10、拿出吸附柱在室溫干燥數(shù)分鐘( 因季節(jié)及氣候等因素不等),或50℃干燥1min。
11 、將吸附柱放入一個新的離心管中,加入 50-100ul 洗脫液(65 ℃預(yù)熱),12000rpm離心1min。
12、將離心管中的液體重新加入到吸附柱中,12000rpm離心1min。離心管中即為土壤微生物 DNA 溶液。
13、若產(chǎn)物PCR 效果差,可以適當(dāng)稀釋 DNA產(chǎn)物,或添加1/10 體積的PCR 增強劑。
注意事項:
1 、新鮮的土壤樣本會得到更高的產(chǎn)率,不同樣本在采樣前應(yīng)先查閱相應(yīng)的最佳保存條件。
2 、若溶液中出現(xiàn)渾濁可在 37℃水浴中溶解片刻至清澈,不會影響結(jié)果。
3 、在需要吸取上清液的步驟中應(yīng)避免吸到沉淀,否則會堵塞吸附柱,并影響產(chǎn)物純度。
4 、洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul ,體積過小會影響回收效率;建議使用試劑盒附帶的洗脫緩沖液,
用水洗脫也會損失部分產(chǎn)物;DNA應(yīng)保存在-20 ℃避免反復(fù)凍融,以防降解。
5 、若產(chǎn)物含有腐殖質(zhì)殘余則會嚴重影響 DNA的光吸收值,應(yīng)采取電泳檢測和分光光度計檢測相結(jié)合的方
式鑒定。
6 、液體試劑避免接觸皮膚,若意外接觸應(yīng)立即使用大量清水沖洗。
Storage:
室溫(15℃-25 ℃) 干燥保存,復(fù)檢期 12 個月,2 ℃-8 ℃保存時間更長。